ARTEMIZINININ SISÄLTÖ ARTEMISIA-VUODEN LUOKKAAN ERIKOISMENETELMIEN SAAVUTUKSET Soktoeva, G.L. Ryzhov, K.A. Dychko, V.V. Khasanov, SV Zhshzhitzhapova, LD Padnaeed Buryat State University, st. Smolin, 24a, Ulan-Ude (Venäjä) Tomskin valtionyliopisto, 36, Lenina Ave., Tomsk (Venäjä) Baikalin luonnonhallinnon instituutti, Venäjän tiedeakatemian Siperian sivuliike, ul. Sakhyanova, 8, Ulan-Ude (Venäjä)
Käsitellään artemisiinin eristämistä Artemisia annua L.: sta ja sen määrällistä määritystä HPLC-MS-menetelmällä. Artemisiniini eristettiin erilaisilla uuttomenetelmillä: maceraatiolla, ultraäänellä ja alikriittisellä CO2-uuttamisella. CO2- ja heksaaniuutteiden komponenttikoostumusta tutkittiin GC-MS: llä.
esittely
Artemisiniini (1) on peroksidiseskviterpeeni [1], joka on erittäin tehokas malarialääkeaine ja tehokkaampien yhdisteiden, kuten artemetiinin, artesunaatin ja joidenkin muiden, esiaste. Artemisiniinin ja sen johdannaisten merkitys perustuu tämän tyyppisen yhdisteen erittäin nopeaan vaikutukseen sen pääasialliseen patogeeniin Plazmodium falciparum, joka myös aiheuttaa aivosairautta. Artemisiniinin kemiallinen ja biokemiallinen synteesi on osoittautunut erittäin kalliiksi ja siksi tällä hetkellä elinkelvottomaksi artemisiniinin tuotannon tärkeimpänä lähteenä [2].
Malaria aiheuttaa mikro-organismi - Plasmodium malaria. Ihmiskehossa on 4 tällaista plasmodiumia, loinen, Plazmodium vivax, P. ovale, P. malariae ja P. falciparum. XX-luvun puolivälissä, kiniinin ja sen johdannaisten laajamittaisen käytön ansiosta, oli mahdollista vähentää merkittävästi malariaa sairastavien potilaiden määrää. Kuitenkin 60-luvulta lähtien. viime vuosisadan malaria muistutti jälleen itsestään. Tämä johtui siitä, että Thaimaassa ja Etelä-Amerikassa malaria Plasmodium (P. falciparum), joka oli resistentti kiniinille, klorokiinille, mefloquiinille ja muille kinoliinipohjaisille lääkkeille, esiintyi ja levisi muilla alueilla [3, 4]. Ongelmana on löytää uusia tehokkaita malarialääkkeitä, joiden joukossa ehdotettiin artemisiniiniä, on tullut ajankohtaiseksi. Tämä ainutlaatuinen yhdiste löydettiin Kiinassa (kiinalainen nimi on qinghaosu). Teokset aloitettiin vuonna 1967 ja niitä kutsuttiin ohjelmaksi 523 [5]. Se eristetään vuotuisesta Atemisia annua L.: n koiruohosta, joka levitetään entisen Neuvostoliiton alueella ja joka kattaa Altai-, Transbaikalia-, Amur-alueen, Kazakstanin, Kirgisian, Uzbekistanin ja Turkmenistanin alueet. Wormwood on laajalti edustettuina Kiinassa ja muissa maissa [6]. A. annuan eri osista eristetyn artemisiniinin kokonaismäärä on noin 0,01 ja 1,4% kuivan lehden massasta [2].
Artemisia annua L. on tärkein raaka-aine artemisiniinin tuotannossa. Maailman terveysjärjestö suositteli vuonna 2001 artemisiniinin käyttöä malarian torjunnan ensilinjan hoidossa, mikä johti yhden vuoden ikäisen koiruohon kasvuun. Enimmäkseen koiruohoa kasvatetaan vuosittain Itä-Aasiassa, lähinnä Kiinassa ja Vietnamissa (70 prosenttia maailman kantojen pinta-alasta), joka on äskettäin otettu kulttuuriin Itä- ja Etelä-Afrikassa (20 prosenttia maailman kantojen pinta-alasta), joka tarjoaa neljänneksen maailmanlaajuisista terveystarpeista [7].
Artemisiniinin lisäksi A. annua on arvostettu sen eteeriselle öljylle, jolla on tyypillinen makea, ruohoinen aromi ja jota käytetään hajuste- ja kosmetiikkatuotteissa. Lisäksi öljyllä on antibakteerisia ominaisuuksia ja sitä voidaan käyttää ihosairauksien hoitoon. Seskquiterpene-laktonien lisäksi, joilla on pääasiallinen terapeuttinen arvo, tämän kasvin eteeriset öljyt sisältävät merkittävän määrän komponentteja, joilla on arvoa, kuten 1,8-cyneoli, artemisia-alkoholi ja ketoni, borneoli ja muut, yhden vuoden ikäisen koiruohun rasvahappokoostumus on hiljattain tutkittu, ja analysoi myös lipofiilisten uutteiden fysiologista vaikutusta ihoon [2].
Artemisia annuan sisältämien biologisesti aktiivisten aineiden rikkaan ja monipuolisen koostumuksen yhteydessä on tärkeää kiinnittää huomiota uusien vuohen kasvualueiden etsimiseen. Buryatian tasavallassa kasvaa 46 polynum-lajia [8], mukaan lukien Artemisia annua L. Puolan vuosituhannen, Buryatiassa kasvavan artemisiniinin sisältöä ei ole aiemmin tutkittu. Tämän työn tarkoituksena oli siis määrätä artemisiniiniä erilaisilla uuttomenetelmillä saaduissa uutteissa.
Kokeellinen osa
Tutkimuksen raaka-aine valittiin maanosan Artemisia annua L. -vyöhykkeen yläpuolella, joka kerättiin elokuun 2010 ensimmäisellä vuosikymmenellä kukinnan aikana.
Artemisiniinin ja muiden biologisesti aktiivisten aineiden (eteerinen öljy) eristäminen suoritettiin käyttäen erilaisia uuttomenetelmiä: maceraatiota, ultraääniuuttoa ja subkriittistä CO2-uuttamista. Uutto tehtiin laboratorio- laitoksissa. Uuttoaineina käytettiin heksaania, etyyliasetaattia, etanolia ja CO2: ta. Tiedot ja uuttamisparametrit on esitetty taulukossa 1. Sakan uutteet erotettiin sentrifugoimalla OP-8UHL4.2-sentrifugissa 5000 rpm: llä ja suodatettiin sitten näytesuodatusjärjestelmän läpi.
Artemisiniinin kvantitointi määritettiin HPLC-MS: llä käyttäen Finnigan Surveyor -suorituskykyistä nestekromatografia, joka oli varustettu autosampler Plus -automaattilevyllä ja LC Pump Plus -pumpulla, jossa oli LCn Advantage MAX (ioni-ansa) Finnigan-ilmaisin, ionisaatiomenetelmä - sähkösumutus. Pylväs "Hypersyl Gold" 150 × 4 mm, täytetty silikageelirakenteella C18-siirretyllä faasilla (hiukkaskoko 5 μm), (valmistaja Thermo electronic Corporation, USA). Eluointi suoritettiin isokraattisessa tilassa (50% (A): 50% (B)), lähtöpuskurin (A) koostumus oli muurahaishapon vesiliuos (pH = 3) + 2 ml kyllästettyä ammoniumasetaattiliuosta, eluointipuskuri (B) - 100% asetonitriili. Eluentin tilavuusvirtausnopeus on 0,5 ml / min, injektoidun näytteen tilavuus (autosampler) on 25 μl. Ionien rekisteröinti suoritettiin positiivisesti varautuneiden ionien (Selected Ion Monitoring, SIM) seurantatilassa, jonka molekyylipaino oli 300 (johtuen ammoniumionin NH4: n lisäämisestä artemisiniinimolekyyliin) ikkunan leveydellä (299-301) m / z. Kvantitatiivinen määritys suoritettiin käyttäen sisäistä standardimenetelmää käyttäen Sigman tilastandardinäytettä.
Uuttomenetelmät ja -parametrit
Nro p / p Uuttomenetelmä Ekstraktantti Uuttamisaika / uuttoparametrit Artemisiniinipitoisuus prosentteina a.s.s.
1 Etanolin 24 h / raaka-aineiden: liuotinsuhde (1: 5) 0,040 ± 0,002
2 Maceraation etanoli 48 h / raaka-aineet: liuotinsuhde (1: 5) 0,038 ± 0,002
3 Heksaanin makerointi 24 h / näytteen suhde: liuotin (1: 5) 0,039 ± 0,002
4 Ultraääniuutto etanoli 15 min / raaka-aineiden suhde: liuotin (1: 5), äänen taajuus 50 Hz, T = 25 ° C 0,039 ± 0,002
5 Ultraääniuutto etyyliasetaatti 15 min / raaka-aine: liuotinsuhde (1: 5), äänen taajuus 50 Hz, T = 25 ° C 0,022 ± 0,001
6 CO2-uuttaminen niin 2 24 h / virtausnopeus 30 l / h, T = 20-22 ° C, P = 6,0-6,2 MPa 0,054 ± 0,003
Lisäksi hiilidioksidi- ja heksaaniuutteiden haihtuvia komponentteja tutkittiin kromatografia-massaspektrometrialla Agilent Packard HP 6890 -kaasukromatografilla MSD 5973N: n kvadrupolidetektorilla. Käytimme 30-metristä kvartsipylvästä TR-5 ms, jonka sisähalkaisija oli d = 0,25 mm, kalvon paksuus 0,25 μm. Kromatografinen erotus suoritettiin kuten on kuvattu [9]. Uutteiden komponentit määritettiin kvalitatiivisesti vertaamalla kokonaismassaspektrejä kasviperäisten A-haihtuvien aineiden massaspektrometriatietojen kromatografin tietojen kanssa. Tkachev, kirjastot NIST 08 ja Wiley 275. Analyysin tulokset esitetään taulukossa 2.
CO2- ja heksaaniuutteiden pääkomponentit
Huippualueen suhteelliset liitännät Huippualueen suhteellinen
CO2-uutteen heksaaniuutteen yhdisteet
CO2-uute Heksaaniuute
Monoterpenoidit pitkäketjuiset hiilivedyt
Trisykyleeni 140181 - trosaani 103969 52288
a-pinene 1155320 - Tricozen-1 1956324 -
Camphene 2021028 - n-pentakosaani 534763 110485
R-pinen 371548 1683858 645634 - - -
n-heptakosaani 279800 132358
3-kareeni
Sykliset hiilivedyt
limoneeni
Pentacyclo 576196 -
R-phellandren 587143 - [7.5.0.0 (2.8).0 (5.14) 0.
1,8-kineoli 133599 - (7.11)] tetradekaani
Artemisia-ketoni 1413437 - 1,8-dimetyylifenantreeni 3765681 1080289
Borneol 170158 707945 - - Flyuoren 3507465 319501
Bornyyliasetaatti
diterpenoidit
seskviterpenoidien
Metyyli-3,5-bis (etyyliamino) bentsoaatti 627581 283913
Cariofillen 370714 214560 - -
Karyofillenoksidi
Germacren D 214913 -
R-Selinene 3053333 328535
a-kadinoli 149485 -
Keskustelu tuloksista
Kuten taulukossa 1 esitetyistä tiedoista ilmenee, artemisiniinin pienin saanto oli (0,022%) ultraääniuutolla etyyliasetaatilla. Artemisiniinin pitoisuus uutteissa, jotka on erotettu ultraääniuutolla ja maceraatiolla käyttäen erilaisia liuottimia (heksaani, etyylialkoholi), ei ole merkittävästi erilainen 0,038-0,040% A: n suhteen. Kun vaaditaan etyylialkoholin koiruohoa vuosittain 24 ja 48 tunnin ajan, artemisiniinin pitoisuus saaduissa uutteissa on suunnilleen sama kuin 0,040 ja 0,038%. Artemisiniinin suurin saanto (0,054%) saatiin esipriittisen CO2-uuttamisen aikana. Vertailun vuoksi esitämme joitakin tietoja artemisiniinin sisällöstä, yhden vuoden koiruohon, joka kasvaa eri alueilla. Artemisia annua L., joka kasvaa eri puolilla Kiinaa, sisältää 0,01 - 0,22% artemisiniinia. Joissakin Kiinassa ja Vietnamissa viljellyistä vuotuisista koiruohonista on 1,0–1,5% artemisiinia [10]. Entisen Neuvostoliiton alueella kasvavan A. annuan artemisiniinin pitoisuus on seuraava (arvot annetaan ilmakuivien raaka-aineiden osalta): Georgian SSR (0,005%), Kirgisian SSR (0,025%), Moldovan SSR (0,01-0,02%), Krasnodarin alue (0,04%), Ukrainan SSR (0,005-0,05%), Turkmenistan (0,05% a.s.c.), Kazakstan (0,01-0,05%) A.S.S.) [11].
Tutkimuksessa vuosittaisen koiruohon uutteiden koostumuksesta, joka saatiin hiilidioksidiuutolla ja maceraatiolla, kun heksaania käytettiin uuttoaineena, kromatografia-massaspektrometria osoitti merkittäviä eroja näiden uutteiden koostumuksessa. Monoterpenoidit, sesquiterpenoidit, pitkäketjuiset hiilivedyt, sykliset hiilivedyt ja diterpenoidit havaitaan massaspektrometrian menetelmällä.
Monoterpenoidit löytyvät vain CO2-uutteesta. CO2-uutteen pääkomponentit ovat a-pinene, 3-caren, artemisia-ketoni, (3-seleneeni, tricozen-1, 1,8-dimetyylifenantreeni ja fluoreeni).
Hiiren uutteessa koiruohon vuotuista kaasukromatografia-massaspektrometriaa, pääasiassa pitkäketjuisia hiilivetyjä ja syklisiä hiilivetyjä, tunnistettiin, 3-seleeni havaittiin sesquiterpenoideista.
Artemisiniinin lisäksi, joka on ensisijainen lääketieteellinen arvo, eteerinen öljy sisältää suuren määrän biologista arvoa omaavia komponentteja, kuten artemisia-ketonia, 1,8-cyneolia, borneolia jne.
tulokset
1. Arteminiinin pitoisuus Buryatian tasavallan alueella kasvavassa A. annuan erässä (antenniosa, kukinta) määritettiin HPLC-MS: llä.
2. Maksimaalinen artemisiniinipitoisuus löytyy CO2-uutteesta (0,054% a.s.c.:n osalta),
3. Kromatografisen massaspektrometrian avulla tutkittiin erilaisten uuttomenetelmien avulla uutetun eteerisen öljyn koostumusta.
Artemisia annua L.
Taxon-kuvaus
Venäjän nimet
taksonomia
kuva
Kasvit kartalla
Kasvitieteellinen kuvaus
Artemisia annua L. Sp. pl. (1753) 847; Bess. Nouvissa. Muisti. Soc. Nat. Mosc. III, 81; Dc. Prodr. VI, 119; LDB. Fl. Ross. II, 592; Boiss. Fl. tai. III, 371; Maxim. Bullissa. Acad. Sc. Petersb. Viii, 528; Koukku. Fl. Br. Ind. III, 323; Com. fl. Manchu. III, 659; Nakai, Fl. Korea. II, 30; Fedch. Adyge. sol. Turk. IV, 200; Rydb. North Am. Fl. 34, osa 3, 259; Pampan. Nuovissa. Giorn. Bot. Ital. N. S. XXXIV, 637; Hall ja Clem. Artem (1923) 102; Com. ja alice. Res. sol. Kaukoidässä kr. II, 1036; Krasheniny. fl. kaakkoon. Europ. Osa USSR, VI, 357; Grossg. Fl. Kavko. IV, 138; Krasheniny. ja siivet. Fl. Zap. Sib. XI, 2816; Polyak. Mayevsky, FL. 586. - A. chamomila Winkl. Tr. Petersburg University. bot. Puutarha, X, 87; Fedch. op. Op. - Ic.: Amm. Stirp. rar. T. 193, f. 23; Gmel. Fl. sib. II-välilehti. 25. - Exs: ГРФ № 3152. - Yhden vuoden koiruoho.
Vuosittainen. Kasvi on tuoksuva, vihreä, paljain tai hajallaan, pienillä vierekkäisillä karvoilla, suora, kylkiluu, ruskehtava tai violetti-ruskehtava varsi 30–100 cm. lehdet ovat pisteviiva-ferruginous, alempi petiolate, 3-5 cm pitkä. ja 2-4 cm leveä., soikea, kolminkertainen pinnacular, viimeisimmän järjestyksen segmentit, pitkänomaiset, lyhyet; koko tai 1-2 hammasta, 1-2 mm pitkä. ja 0,5 mm leveät; keski- ja varrenlehdet ovat kaksinkertaiset pinnat, ylemmät, pienemmät ja vähemmän monimutkaiset, ylemmät luistit ovat yksinkertaisia tai pieniä sivulohkoja. Korit ovat pallomaisia, leveitä, 2–2,5 mm, lukuisia, hylättyjä tai pyöreitä, lyhyillä jaloilla, piirretty yhteen lyhyillä oksilla, b. m. pitkä, pyramidinen panicle-kukinto; kääre on sileä, ulommat esitteet ovat lineaarisesti pitkänomaisia, vihreitä, sisäisiä soikioita tai lähes pyöreitä, reunan ympärillä on laajasti reunustettu kiiltävä reunus; astian kupera, paljain; marginaaliset kukat, 10–20 lukua, kruunun muoto, pistemäiset, kapea lineaariset, stigma-lohkot, tylsä, putkesta altistuvat; levykukat ovat biseksuaaleja, 12–30 kappaletta, kapea suljettu putkimainen, alasti; anhers kapea lineaarinen, ylempi lisäosa pitkänomainen, akuutti-kulmainen, basaalilohkot hyvin lyhyet, terävä; pylväs on lyhyempi kuin huokoset, leimautumisen leima on lineaarinen, suora, hieman poikkeava, kärkikuvio kärjessä; achenes 0,8–0,6 mm pitkä, pitkänomainen-ovaali, litteä, kärjessä pieni, pyöristetty taso, tuskin reunassa. Kol VIII - IX.
In weedy paikoissa lähellä asunto, puutarhat, puutarhoissa. - Eurooppa. h.: Ylä Dnyester., Ylä-Dnepri., Volzh. Don., Volga., Ala. Don., musta., Bess., Krim; Kaukasus: Zap.- ja itä. Trans., Tal., Ke. Aasia: Aral-Casp., Balkh., J.-Tarb., Tien-Shan., Syr-Dar., Pam. - Al., Amu-Dar., Horn. Turkmenistanin. Tot. var.: ke Heb., Srediz., Balk. -Maloaz., Arm.-Kurd., Iran, J.-Kashg., Kit., Jap., Mongolia, North. Amerikka (ulkomaalainen).
Näkemys on Ammanin ja Gmelinin piirustukset.
Kotitaloudet. VAL. Eteerisen öljyn saanto on 0,1–0,64% (Goryaevin mukaan). Joshikazu Imaden (1937) mukaan kineoli ja aine C10H6O ovat öljyssä; tätä ainetta on tutkinut yksityiskohtaisesti Ashania ja Joshitomi (1917); yhdessä artemacyaketonin kanssa, sen isomeeri, isoartemisieatsetoni, todettiin öljyssä. Tämä ketoni pystyi eristämään emäliuoksesta, joka oli jäljellä artemacyacetone semikarbosonin valmistuksessa. Seisi Takagi (1928), joka jatkoi japanilaisen A. annuan tutkimusta öljyyn tunnetuille neljälle komponentille, lisäsi 2 uutta: cadinene ja karyophillen. Rutovskyn ja Vinogradovin (1929) tutkimusten perusteella öljy koostuu a-piinistä, cyneolista, kampeenista, artemisiaketonista ja isoartemisieseketonista, pienestä määrästä borneolia, etikka- ja voihappoa, kimunoaldehydiä (oletettavasti semikarbosonia) ja fenolia (luultavasti eugenolia). Pieni määrä alkaloideja löytyi maanalaisista osista (Lazurievsky, Sadykov, 1939; Massagetov, 1947). Alan havaintojen mukaan (Yunatov, 1954) eläimet eivät syö vihreässä tilassa. Alkaloidien läsnäolo varmistetaan M.I. Goryaeva, G.K. Kruglykhina, E.I. Satdarova (1959).
Lääketieteen tiivistelmä ja väitöskirja (04/04/02) aiheesta: Artemisia annua L. ja Artemisia sieversiana Willd. Buryatian kasvisto
Lääketieteellisen väitöskirjan tiivistelmä aiheesta Artemisia annua L. ja Artemisia sieversiana Willd. Buryatian kasvisto
Käsikirjoituksena
Soktoeva Tuyana Erdemovna
FARMAKOGNOSTIIKKA TUTKIMUS ARTEMISIA ANNUA L. JA ARTEMISIA SIEVERSIANA WILLD. BURYATIAN KIITTEET
04/14/02 - farmaseuttinen kemia, farmakognosia
Väitöskirja lääketieteen kandidaattiasteesta
Väitöskirja tehtiin Venäjän federaation opetus- ja tiedeministeriön valtiollisen valtion budjettikoulutuksen korkeakouluopetuksen korkeakouluopetuksessa "Buryat State University" ja Venäjän tiedeakatemian Baikalin ympäristökeskuksen instituutin perustamisesta.
Ohjaaja: kemian tohtori, professori
Radnaeva Larisa Dorzhievna
Viralliset vastustajat: biologian tohtori, professori
Antsupova Tatyana Petrovna
Lääketieteen kandidaatti Mongolov Hanhai Purbuevich
Johtava organisaatio: Perm State
Venäjän federaation terveys- ja sosiaaliministeriö
Puolustus tapahtuu 23. joulukuuta 2011 klo 10 ° väitöskirjaneuvoston DM 003.028.02 kokouksessa SB RAS: n yleisen ja kokeellisen biologian instituutissa osoitteessa 6, Sakhyanova St., Ulan-Ude, 670047.
Väitöskirja on saatavilla SB RAS: n Buryatin tiedekeskuksen tieteellisessä kirjastossa.
Tiivistelmä julkaistiin 22. marraskuuta 2011.
Väitösneuvoston tieteellinen sihteeri Biologisten tieteiden kandidaatti
TYÖN YLEINEN KUVAUS Aiheen merkitys. Artemisia-suvun (koiruoho) kasvit ovat lupaavia lähteitä biologisesti vaikuttaville aineille, kuten tarragonin koiruoho Artemisia dracunculus L., koiruoho Artemisia absinthium L., koiruoho Artemisia vulgaris L. käytetään laajalti folkissa, perinteisessä lääketieteessä ja elintarviketeollisuudessa. Artemisia annua L., joka on vuotuinen koiruoho, otettiin menestyksekkäästi kulttuuriin monissa maissa, ja WHO suositteli vuonna 2001 sen tärkeimmäksi artemisiniinin lähteeksi, joka on malarian ensihoito. Nykyään artemisiniiniä tuottavat maat tarjoavat noin neljänneksen maailmanlaajuisista terveysvaatimuksista (Tolstikova, 2010; Xiao Wang, 2011). Yhden vuoden ikäisiltä eristettiin 137 biologisesti aktiivista yhdistettä, mukaan lukien 40 sesquiterpeeniä, 10 triterpeeniä, 7 kumariinia, 46 flavonoidia, jotka voivat toimia lääkekehityksen perustana (Bhakuni, 2001). 1900-luvun 80-luvulla ryhmä tutkijoita (Schroeter, 1989) yritti kasvattaa Neuvostoliiton yhden vuoden kasviston villiä kasvua CISA: ssa (Moskova). Nykyään Tomskin valtionyliopistossa toteutetaan merkittäviä teoksia ensimmäisen vuoden erän käyttöönotolle. Burjaatiassa n. Vuosi on villieläinlaji.
Buryatian vuotuisen loisen rinnalla Sivers koiruoho Artemisia sieversiana Willd on laajalti levinnyt, mikä on myös lupaava laji. Seaberan ruoho sisältää flavonoideja, eteeristä öljyä, kumariinia (Tkachev, 2002; Shatar, 1998; Hanina, 1999; Suleimenov, 2009). Siderin eteerinen öljy on kiinnostava kaamatseenin lähteenä, joka on myrkytön yhdiste, jolla on anti-inflammatorisia, bakterisidisiä, regeneratiivisia vaikutuksia (Berezovskaya, 1991; Khanina, 1992).
Tähän saakka Buryatian vuotuisen kasviston Siversin koiruohon ja koiruohon yksityiskohtainen kemiallinen tutkimus ei ole toteutettu lupaavina biologisesti aktiivisten aineiden lähteinä, joten niiden tutkimus on kiireellinen tehtävä.
Tavoite: Sivers-koiruohon Artemisia sieversiana Willdin farmakologinen tutkimus. ja koiruohon vuosittainen Artemisia annua L. arvokkaina biologisesti aktiivisten aineiden lähteinä.
Tämän tavoitteen saavuttamiseksi on tarpeen ratkaista seuraavat tehtävät:
1. Tunnistaa yhden vuoden ikäisten Siversin ja P. antennin osien anatomiset ja diagnostiset merkit, jotta voidaan luoda merchandising-indikaattorit
raaka-aineet, arvioidaan varannot ja mahdollisuus kerätä yksi vuosi ja s. Siversa Buryatian tasavallan alueella;
2. Tutki näiden kasvien biologisesti aktiivisten aineiden pääryhmien kemiallista koostumusta ja määrittää niiden kvantitatiivinen sisältö, määrittää eteeristen öljyjen ja artemisiniinin paikallistamisen kasvien yksittäisissä osissa, tutkia niiden kerääntymisen dynamiikkaa kehitysvaiheissa ja määrittää optimaaliset keräysolosuhteet;
3. Kehitetään menetelmä artemisiniinin kvantitatiiviseksi määrittämiseksi yhden vuoden iän osassa;
4. Määrittele biologisten aktiivisten perusaineiden sisällön laatuindikaattorit ja -standardit, kehittämään lääkkeiden raaka-aineiden sääntelyasiakirjoja - Sivers-koiruohon ruoho ja yhden vuoden koiruohon ruoho.
Tieteellinen uutuus. Sivers- ja P.-vuotuisen ruohon päädiagnostiikkaan perustettiin, kehitettiin raaka-aineiden standardoimiseksi tarvittavat numeeriset indikaattorit.
Tutkimus tehtiin Siversin ruohon ja yhden vuoden ruohon kemiallisesta koostumuksesta. Määritettiin eteeristen öljyjen, flavonoidien, rasvahappojen, makro- ja mikroelementtien pitoisuus. Flavonoidit - luteoliini-7-glukosidi, rutiini, kvertsetiini ja kryoerioli havaittiin näissä kasveissa HPLC-MS-menetelmällä. Tutkittujen koiruohon tyyppisten rasvahappojen palmitiini-, linoleeni-, linoleeni-, 10% oktadekeenihappo löytyy myös merkittävistä koiruohoista.
Artemisiniinin uuttamisen edellytykset (uuttoaineen tyyppi, uuttomenetelmä, uuttamisaika) määritettiin vuosittaisesta yrtistä ja todettiin, että artemisiniinin maksimaalinen uuttaminen saavutetaan ultraääni- ja alikriittisellä CO2-uuttamisella. HPLC-MS: llä on todettu, että suurin osa artemisiniinistä yhden vuoden ikäisissä on kukinnusvaiheessa kukinnoissa.
Tutki eteerisen öljyn kertymisen dynamiikkaa riippuen kehitysvaiheesta ja laitoksen osasta. Suurin määrä kaamatsuleeni eteeristä öljyä s. Siversa kerääntyy kukinnan kukinnan ja kukinnan vaiheisiin.
BAS: n laatukriteerit sisältyvät sääntelyasiakirjoihin.
Käytännön merkitys. Siversin asuinalueen varaukset ja mahdollinen vuosittainen hankintamäärä sekä yhden vuoden ratkaisu Buryatian tasavallan alueella (Siversin asuinpaikka - 0,1-73,7 tonnia vuodessa ja yhden vuoden ratkaisu - 1,2–212,3 tonnia vuodessa).
Tekniikka on kehitetty artemisiniinin kvantitatiiviseen määritykseen p. Grassissa vuosittain HPLC-MS-menetelmällä. Raaka-aineiden näytteenvalmistusolosuhteet artemisiniinin kvantitatiivista määrittämistä varten ovat tieteellisesti perusteltuja.
Raaka-aineiden standardointi on toteutettu, FS-hankkeita on kehitetty - "Sivers Wormwood Herbal" ja "Wormwood One-Year Grass".
Täytäntöönpanon aste. Eteeristen öljyjen ja mikroskooppisten analyysitietojen keräämismenetelmä testattiin ja otettiin osaksi liittovaltion valtiollisen korkeakouluopetuksen laitos Farmasian osaston ”Buryatin osavaltion yliopisto” opetusprosessia (6. syyskuuta 2011 annettu täytäntöönpanolaki nro 1). FS: n hankkeet Sivers-koiruohon ja yhden vuoden koiruohon ruoho on valmisteltu vastikkeeksi.
Puolustukseen on otettu:
• Anatomisen rakenteen, kalakantojen, Siversin ja P: n aitoutta koskevien kriteerien tutkimuksen tulokset, jotka kasvavat Burjaniassa;
• biologisesti aktiivisten aineiden kemiallisen tutkimuksen tulokset ja niiden kertymisen dynaaminen dynamiikka;
• Siversin maanpäällisen osan standardointia koskevien tutkimusten tulokset s. Ja s. Yksi vuosi.
Työn aprobointi. Opinnäytetyön keskeiset säännökset esiteltiin ja niistä keskusteltiin: tieteellis-käytännön konferenssissa, jossa kansainvälinen osallistuminen ”Perinteisen lääketieteen kehitys Venäjällä: kokemus, tutkimus, näkymät” (Ulan-Ude, 2010); Seitsemäs talvi-simposium kemometrian "nykyaikaiset menetelmät tietojen analysoimiseksi" (Pietari, 2010); kansainvälinen tieteellinen konferenssi, joka on omistettu Buryatin osavaltion yliopiston 15-vuotisjuhlalle "Baikalin Aasian todelliset opinnot" (Ulan-Ude, 2010); V kansainvälinen tieteellinen-käytännön konferenssi "Baikalin alueen kehityksen painopisteet ja ominaisuudet" (Ulan-Ude, 2011); X kansainvälinen tieteellinen-käytännön konferenssi "Etelä-Siperian ja Mongolian kasvitieteen ongelmat" (Barnaul, 2011); IV All-Russian -konferenssi "Kasvimateriaalien kemian ja kemiallisen teknologian uudet edistysaskeleet" (Barnaul, 2009); XVI Kansainvälinen opiskelijoiden, jatko-opiskelijoiden ja nuorten tutkijoiden konferenssi "Lomonosov-2009" (Moskova, 2009); XV Kansainvälinen ekologinen opiskelijakonferenssi "Venäjän ja sen lähialueiden ekologia" (Novosibirsk, 2010); II Opiskelijoiden, jatko-opiskelijoiden ja nuorten tutkijoiden koko Venäjän tieteellinen-käytännön konferenssi "Kemian, bioteknologian ja elintarviketeollisuuden teknologiat ja laitteet" (Biysk, 2009); All-Russian tieteellinen-käytännön konferenssi "Kasvillisuus
Baikalin alue ja sen lähialueet ”(Ulan-Ude, 2011); V Venäjän nuorten tutkijoiden kouluseminaari ”Alueen kestävän kehityksen ongelmat” (Ulan-Ude, 2009); alueellinen nuorisotieteellinen-käytännön konferenssi, jossa kansainvälinen osallistuminen "Ympäristöystävälliset ja resursseja säästävät teknologiat ja materiaalit" (Ulan-Ude, 2010).
Teos toteutettiin osana tutkimushankkeita: RFBR: 08-04-90202-Mong_a "Keski-Aasian biologisesti aktiivisten yhdisteiden biosynteesin biogeneettisten mallien tutkimus" (2008-2009), 08-04-98037-r_sibir_a "Kasvien kemiallinen koostumus indikaattorina Baikalin alueen ekosysteemien tila ”(2008-20 Yugg,); monitieteinen integraatioprojekti nro 93 "Tutkimuksen kehittäminen lääketieteellisen kemian ja farmakologian alalla tieteellisenä perustana kotimaisten lääkkeiden kehittämiselle"; yhteinen projekti Mongolian tiedeakatemian kanssa "Uusien lipo- ja nanosomaalisten huumausaineiden hankkiminen luonnon raaka-aineilla"; RFBR: 10-03-16001-mob_ros "Nuorten tutkijoiden liikkuvuus" (2010), 11-03-90705-mob_st Venäjän nuorten tutkijoiden tieteellinen työ (koulutus) Venäjän johtavissa tieteellisissä järjestöissä 2011 (2011).
Julkaisut. Tulosten mukaan julkaistiin 17 tieteellistä artikkelia, joista 3 julkaistiin Venäjän federaation puolustus- ja tiedeministeriön korkeakoulukomitean suosittelemissa aikakauslehdissä.
Opinnäytetyön laajuus ja rakenne. Väitöskirjan teos on esitetty 172 sivua kirjoituskirjoitettua tekstiä ja se koostuu johdannosta, kirjallisuuden tarkastelusta (1 luku), kokeellisesta osasta (4 lukua), yleisistä johtopäätöksistä, referenssiluettelosta ja sovelluksista. Työtä havainnollistetaan 37 taulukolla ja 61 luvulla. Bibliografinen indeksi sisältää 139 lähdettä, joista 42 on ulkomaisia.
Johdannossa aiheen asianmukaisuus on perusteltu, tutkimuksen tarkoitus ja tavoitteet muotoiltu, työn tieteellinen uutuus ja käytännön merkitys esitetään.
Ensimmäisessä luvussa (kirjallisuuden tarkastelu) esitetään tietoja kemiallisesta koostumuksesta, farmakologisen aktiivisuuden spektristä, Artemisia L.-suvun käytöstä perinteisessä ja nykyaikaisessa lääketieteellisessä käytännössä.
Toisessa luvussa (materiaalit ja menetelmät) esitetään tietoja tutkimuskohteista, käytetyistä menetelmistä, laitteista ja reagensseista, muista metodologisista tiedoista.
Kolmannessa ja neljännessä luvussa on tietoja Severs S: n anatomisten ja diagnostisten merkkien ja yhden vuoden ikäisten tutkimuksista. Menetelmällä
UV-spektrofotometria määritti flavonoidien ja tanniinien kokonaispitoisuuden tutkimuskohteissa. GC-MS: n avulla tutkittiin eteerisen öljyn ja koiruohun rasvahappojen kvalitatiivista ja kvantitatiivista koostumusta. HPLC-MS-menetelmä loi flavonoidien kvalitatiivisen ja kvantitatiivisen sisällön. Kasvien alkuainekoostumus määritettiin AAS-menetelmällä. Artemisiniinipitoisuuden kvantifioimiseksi on kehitetty ja ehdotettu tekniikkaa. HPLC-MS: llä. Lisäksi tutkimme viiden polynyasin eettisten öljyjen kemiallisia koostumuksia, jotka ovat yleisimmin löydettyjä Burianatian ja Mongolian alueella - Gmelin Artemisia gmelinii Web-koiruoho. et Stechm., koiruoho, harmaa Artemisia glauca Pall, ex Wild., koiruoho, iso-crested Artemisia macrocephala Jacq. ex Bess., Sievers koiruoho Artemisia sieversiana Willd. ja Artemisia annua L.
Viidennessä luvussa on tietoja yhden vuoden ikäisten Siversin ja P.: n yrtin standardoinnista, jota ehdotetaan lupaaviksi kamaaseenin ja artemisiniinin lähteiksi.
Teoksen pääsisältö
Tutkimuksen kohteet ja menetelmät. Tutkimuksen kohteina olivat Siversin ruohonäytteet ja vuotuiset kylät, jotka kerättiin Irkutskin alueen (Olkhonin saari) ja Mongolian (Selenginsky Aimak) useilta Buryatian tasavallan (Ivolginsky, Pribaikalsky, Selenginsky, Tunkinsky, Zakamensky, Kurumkansky) alueilta. vuoteen 2011 saakka
Mikroskooppinen analyysi suoritettiin artikkelin "Mikroskooppisen analyysin tekniikka" (GF XI, numero 2) mukaisesti mikroskoopilla (Lomo, Venäjä) okulaarilla 10x; linssit 4x, 10x, 40x ja MS-300 (TFXS), loisteputkisarja (Micros, Itävalta) okulaarilla 10x; linssit 4x, 10x, 40x. Raaka-aineiden tuotto määritettiin kirjanpitokohtien menetelmällä.
Eteerisen öljyn uuttaminen suoritettiin hydrodistilloimalla, uutteet saatiin ultraääniuutolla, CO2-uuttamisella ja maceraatiolla.
Näiden kohteiden laadullisen ja kvantitatiivisen koostumuksen tutkimus suoritettiin seuraavilla menetelmillä - GC-MS, HPLC-MS, TLC, BC, UV-spektrofotometria ja AAS. Kromatomispektrometrinen analyysi suoritettiin Agilent 6890 -kaasukromatografilla HP MSD 5973N: n kvadrupolimassaspektrometrillä (Agilent Technologies, USA; pylväät: HP-5ms, g = 0,25 mm, kalvon paksuus 0,25 um (kopolymeeri - 5%, difenyyli - 95% dimetyylisiloksaania) ja DBWaxia, jonka sisähalkaisija on 0,25 μm, kantajakaasu - helium, g) virtaus 1–1,5 ml / min; HPLC-MS-analyysi suoritettiin korkean suorituskyvyn nestekromatografeilla Finnigan Surveyor (Thermo Scientific, USA) ja Agilent 1200 (Agilent Technologies,
USA) ”Finnigan” -brändin (Thermo Scientific, USA) massanelektiivisellä ilmaisimella ”LCQ Advantage MAX” ja tandemmassaspektrometrinen ilmaisin (”ionilukko”) 6330 (Agilent Technologies, USA), menetelmä ionisaation sähkösumutus; olosuhteet: Hypersyl Gold Cl8, 5 mikronia, 150x4 mm pylväät (Thermo electronic Corporation, USA) ja Zorbax Eclipse C18, 5 mikronia, 4,6 x 150 mm (Agilent Technologies, USA), eluentin virtausnopeus 0,5 ml / min. TLC-analyysi suoritettiin Sorbfil PTSH-P-A-UV -levyillä (Imid Ltd, Venäjä); BC-analyysi suoritettiin FN6-paperilla (Filtrak, Saksa); Absorptiospektrit rekisteröitiin StellarNet Green Waiv -spektrometrillä (StellarNet Inc, USA), AAC-analyysi suoritettiin SOLAAR MB -spektrofotometrillä (Thermo Scientific, USA) ja Varían-mallilla AA240 (Varian, Venäjä).
Kokeellisen datan tilastollinen käsittely suoritettiin variaatio-tilastollisen analyysin menetelmällä. Osa tiedoista käsiteltiin CIM: llä (ohjelmistopaketti Sirius version 6.0, Pattern Recognition Systems, a / s, Norja).
P. Siversin ja P.: n yrtin farmakologiset ominaisuudet kesällä. Seuraavat lääkkeiden raaka-aineiden laadun indikaattorit. Grass sibers koiruoho. Koko raaka-aine. Kovia tai osittain lehtisiä kukkien yläosia, joiden pituus on enintään 45 cm ja jotka eivät sisällä varren karkeita osia. Varsi karvainen, suora, kylkiluun ja haarautunut. Radikaalit ja keskilehdet ovat petiolate, leveä kolmion muotoisia, kolme kertaa pinnoitettuja, pitkänomaisia litteitä viipaleita, 1,4 - 2,5 cm pitkiä, 0,1 - 0,5 cm leveitä, puolipallomainen korit, halkaisijaltaan 0,4 - 0,6 cm, leveät paniculate kukinto. Edge pistillate kukat (on noin 18). Kukat biseksuaali, lukuisia, suppilonmuotoisella korolla.
Ruohon koiruoho vuosittain. Koko raaka-aine. Kiinteät tai osittain lehtipäät, jotka eivät ole korkeintaan 50 cm pitkiä ja jotka eivät sisällä rungon karkeita osia. Varsi on paljain, suora, korvattu, vihreä kasvukauden alussa, tumma violetti lopussa. Alemman ja keskimmäisen varrenlehtien lehti on munanmuotoinen tai soikea, 1,5-7,0 cm pitkä, pituudeltaan elliptinen, ilman siipiä, kolme kertaa yliekspressoitu leveiksi segmenteiksi, segmenteiksi ja segmenteiksi, 0,5 - 0,8 cm pitkä, ei leveä yli 0,2 cm: n korit, joiden läpimitta on noin 0,2 cm.
Kun suoritetaan anatominen tutkimus P. Siversin ja P.: n ruohosta yhden vuoden ajan, tunnistettiin useita anatomisia ja diagnostisia ominaisuuksia. Koiranlehtien rakenne on esitetty taulukossa 1. Sivers-koiruohon varsi on karkea, pitkänomaiset epidermisolut.
On eteerisiä öljy rauhasia, T-muotoisia hiuksia ja pyöristettyjä stomataalisia soluja. Varren rakenteessa on säteen tyyppi. Ribeissa on ohuet alueet. Piiriin järjestettyjä kaulalautapalkkeja luonnehtii voimakkaasti kehittynyt sclerenchyma. Hyvin merkitty endodermi, joka koostuu suurista, ohutseinäisistä, pyöreistä soluista, jotka ovat tiiviisti vierekkäin.
Sivun lehtien anatomisen rakenteen ominaisuudet ja s. Yksi vuosi __
Sivers koiruoho epidermis koiruoho vuosittain
ylempi suora seinä
alemman käämiseinän ollessa matala
Ustigichesky-laitteen ylempi anomosyyttinen tyyppi
alempi anomosyyttinen, stomata enemmän kuin lehden yläpuolella
stomata-soikea muoto linssin stomatal -soluilla
T-muotoisten karvojen tiheästi karvaisia karvoja, jotka koostuvat kahdesta, neljästä solusta ja monisoluisista, karvattuista karvoista, on kahdenlaisia hiuksia - stellate ja T-muotoinen ja monisoluinen jalka
terpenoidia sisältävät rakenteet ovat monisoluisia, suuria eteerisiä öljy- rauhasia. skitsogeeniset astiat ja spesifiset parenkymaaliset solut
yhden vuoden ikäisen, uritetun, lähes paljaan varren, pitkänomaisten epidermisolujen kohdalla. Yhden vuoden ikäisten varsien ja s. Siversin, puchkovy-tyyppisen rakenteen, varrella on eteerisiä öljyjä, harvoin hiuksia ja soikea stomataalisia soluja; Molemmissa koiruohon tyypeissä putkimaisten kukkien korolla olevat epidermaaliset solut ovat ohutseinäisiä, pitkänomaisia ja teräviä päitä, joille on tunnusomaista suuri määrä eteerisiä öljy- rauhasia ja karvojen puuttuminen.
Useita raaka-aineiden eriä varten on laadittu myyntiluvut:
Grass sibers koiruoho. Kosteus (enintään 7%), tuhka yhteensä (enintään 11%), 10% suolahappoon liukenematon tuhka (enintään 2%), uuttoaineet (vähintään 33%), lehdet ruskeat ja mustatut (enintään 5%) ), orgaaninen epäpuhtaus (enintään 2%), mineraalipitoisuus (enintään 0,5%).
Ruohon koiruoho vuosittain. Kosteus enintään 7%, tuhka yhteensä (enintään 9%), 10% suolahappoon liukenematon tuhka (enintään 1%), uuttoaineet (vähintään 42%), lehdet ruskeat ja mustatut (enintään 5%), orgaaninen epäpuhtaus (enintään 2%), mineraalipitoisuus (enintään 0,5%).
Alustavan fytokemiallisen analyysin tulosten mukaan Siversin ja P.: n ruoho löytyi eteerisestä öljystä, flavonoideista, tanniineista, hydroksikiinihapoista, kumariinista, rasvahapoista ja sesquiterpeenilaktoneista.
Siversin ja P.: n varastot vuodessa. Taulukossa 2 esitetään tiedot Siversin tuotoksista, biologisista (BZ) ja käyttövaroista (EZ) ja vuosittain kasvavista Buryatian eri alueista.
S. Siversin raaka-aineiden varastot ja p.
sadonkorjuualue (g / m2) E-kasvun kokonaismäärä, (ha) BS (kg) EZ (kg)
env. Gusinoozerskin kaupunki 58,0 ± 4,1 0,8 530,0 398,4
env. a. Ganzurino 33,8 ± 2,4 0,4 154,4 116,0
env. a. Boraatit 220,6 ± 15,1 20,0 50160,0 41100,0
env. Taphar 500,0 ± 26,3 0,5 2763,0 2237,0: lla
env. a. Sotnikovo 240,2 ± 19,4 25,0 69750,0 52850,0
env. Ulan-Ude 500,0 ± 32,5 0,5 2815,0 2175,0
Kabansky-alue 285.SH = 19,7 30,0 97320,0 73680,0
Tunkinsky District 70,0 ± 8,0 0,2 172,0 108,0
Pribaikalskin piiri 280,9 ± 25,3 1,0 3315,0 2297,0
Kurumkansky-alue 370,6 ± 34,0 0,1 438,6 302,6
env. a. Hurumsha 228,0 ± 10,8 0,6 14,97,6 1238,4
env. Väestö 500,0 ± 46,2 30,0 177720,0 122280,0
env. a. Sotnikovo 39,0 ± 2,1 25,00 10800,0 8700,0
Kabansky District 400.0 ± 27.1 30.0 136260.0 103740.0
Sivers-koiruohon maanpäällisen osan tuottavuus ja vuotuinen piste tutkituissa sakeissa vaihtelevat 33,8 ± 2,4 - 500,0 ± 32,5 g / m2 ja 39 ± 2,1 500 ± 46,2 g / m2. Tutkittujen kasvien maanpäällisten osien biologiset ja toiminnalliset varaukset ovat 154,4-97320,0 kg ja 116,0-73680,0 kg (Sivers koiruoho), 1 497 6177720,0 kg ja 1238,4-122280,0 kg (vuotuinen koiruoho).
Kemiallinen tutkimus P. Siversin ja P.: n yrtistä vuotuisista flavonoideista. Flavonoidien kokonaismäärällisyys määritettiin yleisesti hyväksytyllä menetelmällä Sivers- ja P.-yksivuotisten ruohon spektrofotometrisellä määrityksellä luteoliini-7-glukosidin suhteen kasvien kehityksen eri vaiheissa (kasvillisuus, orastuminen, kukinta, hedelmä). Suurin flavonoidien pitoisuus määritettiin Seversin näytteissä ja yhden vuoden ikäisissä näytteissä, jotka kerättiin keräysvaiheessa - 0,68 ja 0,66%, alin - raaka-aineissa, jotka kerättiin hedelmä- faasissa - 0,31% ja 0,38% (taulukko 3).
Flavonoidien määrän kvantitatiivinen pitoisuus luteoliini-7-glukosidissa P. Siversin ruohossa ja P.-ruohossa vuoden kuluttua kasvillisuusvaiheesta riippuen
kasvin kehitysvaihe, flavonoidien määrä luteoliini-7-glukosidina (%)
Wormwood Sivers koiruoho vuosittain
kasvillisuus 0,67 ± 0,02 0,64 ± 0,04
hirviö 0,68 ± 0,05 0,66 ± 0,03
kukinta 0,48 ± 0,03 0,52 ± 0,02
hedelmää 0,31 ± 0,01 0,35 ± 0,01
Seuraavat flavonoidit havaittiin HPLC-MS-menetelmällä: rutiini, luteoliini-7-glukosidi, kryo-erioli, kvertsetiini Siversin ruohossa ja yhden vuoden ruoho (kuvio 1).
Kuva 1. Flavonoidien ja P. Siversin, P. kromatogrammi yhden vuoden.
Ulkopuolista standardimenetelmää käytettiin rutiinin, kryserolin, kvertsetiinin kvantitatiivisen sisällön määrittämiseen Siversin ruohossa ja yhden vuoden ruoho (taulukko 4).
Molemmissa koiruuvityypeissä luteoliini-7-glukosidi 0,04-0,08% (Sivers) ja 0,88–1,77% (n. Yksi vuosi) sisältyvät suurimpaan määrään, kverketiini 0,001% (Sivers) ja 0,0070,009% (n. vuosittainen).
Flavonoidien kvantitatiivinen pitoisuus (HPLC-MS)
Sivers Wormwood Flavonoid-kokoelma (%)
rutiini-kvertsetiini luteoliini-7-glukosidi
Ivolginskyn alue, okr. a. Taphar, 0,002 ± 0,0001 0,001 ± 0,0002 0,040 ± 0,003
Ivolginskyn alue, okr. s. Sotnikovo 0,002 ± 0,0002 0,001 ± 0,0001 0,080 ± 0,005
FLY on vuoden ikäinen ja Ivolginskin piiri, okr. s. Sotnikovo 0.018 ± 0.001 0,007 ± 0,0003 0,880 ± 0,004
Kabansky-alue, okr. a. Torakko 0.012 ± 0.002 0,009 ± 0,0003 1,700 ± 0,005
Rasvahapot. Koiranäytteet sisältävät 8 - 13 rasvahappoa. Yleiset molemmille lajeille ovat palmitiini (16: 0), linolihappo (18: 2p6), linoleeniset (18: ZpZ) hapot, 56,87-82,67% (kokonaisrasvahappojen määrä) Seversissä, 58,36-67,19%. n vuoden (rasvahappojen kokonaismäärä). Näiden happojen lisäksi merkittävä määrä sisältää 10-oktadekeenihappoa (18: 1p8) 3,64%: sta 11,65%: iin. Myös kaikissa näytteissä havaittiin 10-metyyli-undekaanihappoa (¡° 12: 0) ja 12-metyyli-tetradekaanihappoa (ja 15: 0), niiden pitoisuus ei ylitä 1%. Kromatogrammit esitetään kuviossa 2.
Kuva 2. Rasvahappojen kromatogrammit (a) s. Sivers ja (b) s. Yksi vuosi (I - (16: 0), 2 - (18: 2) 6, 3 - (18: ЗПЗ), 4 - (18: 1) 8) ).
Alkuainekoostumus. Siverin ruoho, joka kasvaa Buryatian eri alueilla, on kalsiumpitoisuus 0,56 ± 0,02-0,89 ± 0,03%, magnesium - 0,12 ± 0,01-0,28 ± 0,01%. Suurin kalsium- ja magnesiumpitoisuus on havaittu Kurumkansky-alueella kerätyissä näytteissä, pienin magnesiumin pitoisuus Tunkinsky-piirin raaka-aineissa ja kalsium kasveissa, jotka on kerätty Selenginskyn alueella. Rautaa löytyy enimmäkseen Kurumkansky-alueen kasveista
(141,25 ± 12,13 mg / kg), vähemmän - Selenginskyn alueelta (141,25 ± 12,13 mg / kg).
Sinkin pitoisuus vaihtelee 23,73 ± 1,56 - 59,8 ± 1,56 mg / kg - п. Sivers ja 55,32 ± 0,83 - 66,50 + 0,89 mg / kg on yhden vuoden ikäinen, mikä on hyväksyttävää biokemiallisten prosessien normaalille toiminnalle. Kuparipitoisuus on 8,42 ± 0,45-24,30 ± 1,56 mg / kg -n. Siverit, 9,37 + 0,18-13,48 + 0,44 mg / kg - yksi vuosi (vaadittu määrä on 5 - 30 mg / kg). Seaberan nurmessa oleva nikkeli sisältää 0,40 ± 0,01 -2,06 ± 0,03 mg / kg, joka vastaa kasvitarpeen 0,1 - 5 mg / kg. Koboltin pitoisuus laitoksessa ei saisi ylittää 1 mg / kg, lyijy - 10 mg / kg, kadmium - 0,2 mg / kg, kromi - 1,0 mg / kg (Kabata-Pendias, 1989; Kashin, 2009). Sivers p. Koboltin pitoisuus on alle 0,3 mg / kg, lyijy on 3,19 ± 0,11 mg / kg, p. Yksi-vuotias - 0,59 ± 0,02 mg / kg, kadmium - 0,18 ± 0,02 mg / kg, kromi - 0,76 ± 0,02 mg / kg kaikissa näytteissä. Siten makro- ja mikroravinteiden pitoisuus on konsentraatioissa, jotka ovat normaaleja ja riittäviä elintärkeiden toimintojen virtaamiseksi kasveille.
Sivers koiruoho yrtti eteerinen öljy. Kasveista saatu eteerinen öljy eristettiin farmakopean menetelmällä nro 2. Erilaisissa p. Näytteissä Siversin eteerinen öljypitoisuus vaihtelee välillä 0,1 - 1,9%. Siverin eteerisissä öljyissä, jotka kasvavat Buryatian eri osissa, on tunnistettu yli 80 yhdistettä.
Olemme tutkineet Sivers-koiruohon ruohosta eristyneiden eteeristen öljyjen koostumusta, joka kasvaa Buryatian eri osissa
(Ivolginsky (1), Selenginsky (2), Kurumkansky (3), Pribaikalsky (4.9),
Tunkinsky (5), Zakamensky-alue (8), Irkutskin alue (Olkonin saari) (6) ja Mongolia (7). Eteeristen öljyjen suurin saanto on Siversin koiruohonviljelyssä Tunkinsky- ja Kurumkansky-alueilla (0,4%). Zakamenskyn, Pribaikalskin alueiden ja Mongolian alueella (0,1%) kerätyistä kasveista eristettiin vähimmäismäärä öljyä (kuvio 3).
Eteerisen öljyn kertymisen dynamiikkaa tutkittiin kasvien kehityksen vaiheen mukaan (kuvio 4). Tulokset osoittivat, että suurin määrä öljyä kertyy kukintavaiheessa (0,6%)
Kuva 3. Eteeristen öljyjen saanto s. Siverit kasvupaikasta.
hedelmöitymisen ja hedelmöityksen vaiheet kertyvät samaan määrään eteeristä öljyä (noin 0,3%).
1- 1,8-daani-I-terpineaali-4-3-p-farmaseeni '1 ■ sishna-4,11-dnen
Kuva 5. Eteerisen öljyn kromatogrammi s. Sivers.
Kuva 4. Eteerisen öljyn saanto p.
Erilaiset kasvinsuojeluvaiheet (kasvukaudella, b - orastava, c - kukinta,
Kaikki eteerisen öljyn komponentit voidaan jakaa kahteen ryhmään - vakio, eli löytyy öljystä kaikissa kasvien kehityksen vaiheissa ja satunnaisesti (vähäinen). Kaikissa Siversin eteerisen öljyn näytteissä kasvien kasvualueesta riippumatta 1,8-kineoli (2,34–22,57%), terpineoli-4 (0,964.70%), germakreeni E (8,66-12,36%), P-farnezen (0,64 - 5,17%), Selina-4,11-dieeniä (0,97-4,66%), Neril-2-metyylibutanoaattia (4,80-8,79%) ja Chamazulene (0,60-25,36%) (kuvio 5).
Hedelmäviljelyalueilla kasvavista kasveista eristetyt eteeriset öljyt Pribaikalskin alueella (25,36%) sisältävät pienimmän määrän hamazuleenia ja pienintä - Zakamensky-alueella (0,60%).
Kasveista eristetyn eteerisen öljyn koostumuksessa eri kasvuvaiheissa - kasvillisuus, orastava, kukinta ja hedelmä, tunnistettiin 54 yhdistettä. Jatkuvat komponentit ovat 1,8-cyneoli, linalool, terpineoli-4, a-terpineoli, p-farnezeeni, selina-4,11-dieeni, chamazuleeni.
Kamatsuleenipitoisuus vaihtelee 0,20 - 24,69%: iin kasvillisuusvaiheessa, 21,34%: sta 61,91%: iin laskevassa faasissa, 1,53: sta 34,42%: iin kukinnan aikana, 10,87%: sta 20,64%: iin hedelmävaiheessa. Satunnaisesti esiintyvien komponenttien joukko on merkittävä (korkeintaan 40 yhdistettä) samanaikaisesti matalalla määrällisellä sisällöllä, joten on vaikeaa tunnistaa niiden koostumuksen riippuvuus kasvien kehityksen vaiheesta.
Kehitysvaiheen vaikutuksen arvioimiseksi öljyn komponentteihin käytettiin CIM: ää (kuva 6).
Kuva 6. GK-malli koostumuksesta
eteerinen öljy Siversin kehitysvaiheesta (I-kasvillisuus, 2-orastava, 3-kukinta, 4-hedelmäinen)
tämä on yksi analyysistä
moniulotteiset tiedot, jotka mahdollistavat piilotettujen muuttujien jakamisen suuriin tietoryhmiin ja analysoimaan suhteita,
olemassa tutkitussa järjestelmässä. Pääkomponenttimenetelmän tavoitteena on korvata näytteiden alkuperäinen kuvaus p-muuttujilla uudelle muodolle, joka on esitetty pääkomponenttien avaruudessa (Esbenson, 2010).
GK-mallissa on mahdollista erottaa toisistaan erotetut erilliset alueet, jotka vastaavat Sivers-koiruohon eri kehitysvaiheita, mikä osoittaa, että öljyn koostumus erilaisissa kehitysvaiheissa eroaa pienempien yhdisteiden pitoisuudesta.
Näin ollen Siversin kehityksen eri vaiheissa eteerisen öljyn laadullinen koostumus yhtenee tasaisesti ja eroaa pienissä yhdisteissä.
Tutkimus kasvien kehityksen vaiheista osoitti, että Seversan eteerisen öljyn suurin kaamatsuleenin määrä on keskittynyt orastaviin ja kukinnan vaiheisiin, kun taas öljyn kertyminen kukoistusvaiheessa on suurempi kuin alkuvaiheessa. Siksi tutkimme näiden vaiheiden aikana eteeristen öljyjen kertymisen erityispiirteitä laitoksen eri osissa (kuva 7).
Tietoja orastavasta vaiheesta Kukkavaiheessa
Kuva 7. Eteerisen öljyn saanto Siversin eri osissa.
erottuva eteerinen öljy kasvien eri osista kukinnan aikana osoitti, että kukinnot (korit) ovat tunnusomaisia korkeimmalla saannolla, lehdet ovat pienempiä ja varret ovat vähäisiä. Vaiheessa
P. Siversin ruoho on pääosin sisältänyt öljyjä silmuissa, hieman vähemmän lehdissä ja vähimmäismäärää öljyä varret.
Tehtaan eri osista peräisin olevan eteerisen öljyn analyysi paljasti, että Siversin kukinnoista ja ruohosipuista uutetun öljyn komponenttikoostumus on monipuolisinta, yli 70 komponenttia, sitten yli 40 komponenttia lehdistä ja vähemmän kuin kaikki varsista uutetussa öljyssä olevat yhdisteet ovat noin 20 komponentteja. Eteeristen öljyjen näytteiden vakiotekijät ovat niiden sijainnista riippumatta 1,8-cyneoli, linaloli, terpineoli-4, germacren 13, a-terpineoli, a-bisabololi ja chamazulene (taulukko 5).
Sivers Wormwood Essential Oilin jatkuvat osat
komponenttien pitoisuus prosentteina koko öljystä
kukoistusvaihe
kukinnot lehdet varret silmut lehdet varret
1,8-kineoli 8,00 6,39 6,04 1,94 + 23,41
linalool 5,93 1,38 0,65 + + 3,83
terpineoli-4 2,56 2,10 0,57 0,88 + 5,37
a-terpineoli 2,39 2,10 0,82 1,44 + 4,66
Germakren E 7,20 7,81 1,96 11,18 7,81 10,57
a-bisabololi 2,28 1,25 1,66 5,24 10,93 5,86
Chamazulene 6,23 23,02 37,11 7,81 21,17 3,51
Analyysi osoitti, että eri kasvualueilla, eri kehitysvaiheissa ja Seversan eri osissa, eteerisen öljyn laadullinen koostumus yhtenee tasaisesti ja poikkeaa satunnaisesti esiintyvistä yhdisteistä.
Eterinen öljy koiruoho vuosittain yrtti. Kuten ensimmäisessä tapauksessa, eteerisen öljyn valinta suoritettiin farmakopean menetelmällä nro 2. Kemiallinen koostumus p. Vuosittaiset eteeriset öljyt edustaa 40 komponenttia. Jatkuvat komponentit ovat artemisia ketoni (10,24–14,62%), karyofylleeni (9,93–10,71%), germakreeni B (3,53–7,82%), p-seleneeni (21,75–29,46%), karyofillenoksidi (4,44–14,31%) (kuva 4). 8).
Kasvien kehityksen eri vaiheissa koiruohon yrtistä otetaan 0,5 - 0,7% eteeristä öljyä. Eteeristen öljyjen korkein saanto kukinnan aikana (0,7%) (kuva 9).
Kasvin kehityksen kaikissa vaiheissa eteerinen öljy sisältää artemisia-ketonia, karyofillenia (3-seleeni, karyofylneoksidi), jonka pääkomponenttien kvantitatiivinen sisältö kasvien kehityksen eri vaiheissa vaihtelee, ja artemisia-ketonin pitoisuus on suurin hedelmäfaasissa, P-seleneenissä - kasvuvaiheessa, ja karyofillenoksidi - kukinnan aikana.
3. Eteerisen öljyn kromatogrammi s. Yksi vuosi.
Kuva 9. Eteeristen öljyjen saanto p. Vuotuinen kasvin eri vaiheissa (kasvillisuus, b-bud, c-kukinta, p-hedelmä).
Eteeriset öljyn rauhaset jakautuvat epätasaisesti kasvien kesken, joten kasvien eri osista voidaan erottaa eteeriset öljyt, jotka eroavat sekä määrällisesti että laadullisesti.
Eteeristen öljyjen kertymisen erityispiirteet kukinnusvaiheessa vuosittaisen koiruohon eri osissa (kuva 10) on määritetty.
Yli 60 yhdistettä löytyi kasvien eri osista peräisin olevissa eteerisissä öljyissä. jatkuva
kukat, lehdet, varret sisältävien öljyjen komponentit ovat artemisia-alkoholi, p-karyofilli, oksidi
Vuosittaisen eteerisen öljyn pääkomponentti on artemisia ketoni - sitä ei löydy varsista peräisin olevasta öljystä, vaikka se on puolet kukinnoista (49,14%) ja lähes kolmanneksesta lehdistä (29,76%).
Eteeristen öljyjen analyysi osoitti, että eri kasvualueilla, eri kehitysvaiheissa ja n: n eri osissa. Vuosittainen ruoho sekä n. Sievers-ruoho, eteerisen öljyn laadullinen koostumus on sama vakiona ja erilaisina satunnaisesti esiintyvissä komponenteissa.
Menetelmän kehittäminen artemisiniinin kvantitatiiviseksi määrittämiseksi koiruohossa vuosittaisella menetelmällä HPLC-MS
Artemisiniinin kvantitatiivisen uuttamisen ehtojen valinta vuotuisesta koiruohosta. Kehitetään määrällinen menetelmä
1 2 kuviosta. 10. Eteerisen öljyn saanto vuosittain eri osissa (1-kukinto, 2-lehti, 3-varret).
Artemisiniinimääritykset P: n ruohoissa, joissa oli vuoden ikäisiä uutto-olosuhteita, valittiin siten, että artemisiniinin uuttaminen saavuttaa maksimiarvonsa. Makeroinnin, ultraääniuutuksen ja alikriittisen CO2-uuton avulla saadut uutteet analysoitiin. Uuttimina käytettiin erilaisia liuottimia (taulukko 6). Artemisiniinin pitoisuus uutteissa, jotka erotetaan ultraäänilevityksellä ja erilaisilla liuottimilla, ei ole merkittävästi erilainen (0,038-0,040%). Suurin määrä artemisiniiniä (0,054%) sisältyy alikriittisen CO2-uuton aikana saatuun uutteeseen.
Yhden vuoden ikäisten koiruohon ruohon uutteiden erotusmenetelmät ja -parametrit eri uuttomenetelmillä ______
uuttomenetelmä uuttoaineen uuttoaikaa / uuttoparametreja artemisiniinipitoisuus prosentteina a.s.s.
etanoli 24 tuntia / raaka-aineiden suhde: liuotin (1: 5), T = 25 ° С 0,040 ± 0,002
Maceraation etanoli 48 h / raaka-aineiden suhde: liuotin (1: 5), T = 25 ° С 0,038 ± 0,002
Heksaani 24 h / näyte: liuotinsuhde (1: 5), T = 25 ° С 0,039 ± 0,002
etyyliasetaatti 15 min / raaka-aineiden suhde: liuotin (1: 5), äänen taajuus 50 kHz, T = 25 ° С 0,022 ± 0,001
etanoli 5 min / raaka-aineiden suhde: liuotin (1: 5), äänitaajuus 50 KHz, T = 25 ° С 0,022 ± 0,001
Etanolin ultraääniuutto 10 min / raaka-aineiden suhde: liuotin (1: 5), äänitaajuus 50 KHz, T = 25 ° С 0,024 ± 0,001
etanoli 15 min / raaka-aineiden suhde: liuotin (1: 5), äänitaajuus 50 KHz, T = 25C, C 0,039 ± 0,002
etanoli 20 min / raaka-aineiden suhde: liuotin (1: 5), äänitaajuus 50 kHz, T = 25 ° С 0,039 ± 0,002
CO2-uutto CO2 24 h.1 virtausnopeus 30 l / h, T = 20-22 ° C, P = 6,0-6,2MPa 0,054 ± 0,003
Kaikista ehdotetuista uuttamismenetelmistä ultraääniuutto on optimaalinen (etanolin uuttoaine), koska tämä menetelmä on nopea (uuttamisaika 15 minuuttia) ja se on saatavana instrumentoinnin avulla.
Artemisiniinin määritysmenetelmä.
HPLC-MS: n avulla kehitettiin tekniikka artemisiniinin kvantitatiiviseksi määrittämiseksi vuotuisen yrtin yrtissä. Käytimme Agilent 1200 HPLC: tä MC-ilmaisimella ("ionilukko") 6330, ionisaatiomenetelmällä - sähkösumutus. Eluointi suoritettiin isokraattisessa tilassa (50% (A): 50% (B)), lähtöpuskurin (A) koostumus, muurahaishapon vesiliuos (pH = 3) + 2 ml kyllästettyä ammoniumasetaattiliuosta, eluointipuskuri (B) - 100% asetonitriiliä. Eluentin tilavuusvirtausnopeus on 0,5 ml / min, injektoidun näytteen tilavuus on -25 μl. Ionit rekisteröitiin positiivisesti varautuneiden ionien (SRM) seurantamoodissa, jonka massa oli 300 (johtuen NrH4-ionin lisäämisestä artemisiniinimolekyyliin), ikkunan leveys (299301) m / z. Tulokset varmistettiin tandemmassaspektrometrialla, tytärioni (MS2), jonka massa oli 223 m / z, saatiin perusionista (MS), jonka massa oli 300 m / z.
Artemisiniinin retentioaikojen ja massaspektrien sattuma, joka määritetään yhden vuoden ikäisen ruohon kanssa käyttäen osoitetun yhdisteen CO-liuosta, antaa meille mahdollisuuden päätellä, että puhdas yhdiste on identtinen puhtaan artemisiniinin kanssa (kuvio 11, 12).
Kuva 11. CO-artemisiniinin ja P.-vuotuisen uutteen kromatogrammi.
iv ix язтжяауат ассс »
Kuvio 12. A-artemisiniinin massaspektrit, jotka sisältyvät n. Vuotuiseen ruohoon, b) artemisiniini CO: iin.
Kromatografia-massaspektrometriaan käytettiin kvantitatiiviseen analyysiin absoluuttista kalibrointimenetelmää. Kalibrointikäyrän kertoimen määrittämiseksi valmistettiin useita (vähintään 20) artemisisiniinin kalibrointiliuoksia. Liuosten valmistus suoritettiin seuraavasti: 5 x 10 "3 g artemisiniiniä punnittiin, laitettiin 50 ml: n mittapulloon, lisättiin 25 ml asetonitriiliä.
sekoitetaan perusteellisesti täydelliseen liukenemiseen, minkä jälkeen pullon tilavuus saatettiin merkkiin tislatulla vedellä. Suoritettu analyysi injektoidun näytteen eri tilavuudessa 1 - 40 μl. Kromatogrammien huippupinta-ala mitattiin. Saatujen tietojen mukaan muodostettiin kalibrointikäyrä (kuvio 13). Piikkialueen arvot piirrettiin ordinaattiakselille, ja vastaavat artemisiniinipitoisuuden (g) arvot piirrettiin abskissa-akselille.
Saaduista tiedoista laskettiin kalibrointikäyrän kerroin: к = Б / х, jossa к on kalibrointikäyrän kerroin, 5 on analysoidun liuoksen piikkipinta-ala, х on artemisiniinin (g) pitoisuus
Kalibrointikäyrän (k) kerroin määritellään kertoimien k, aritmeettiseksi keskiarvoksi.
Kuva 13. Valmistumiskaavio artemisiniinipitoisuuden määrittämiseksi.
Yhden vuoden koiruohonuutteen artemisiniinipitoisuus määritettiin kaavalla: C = 5 / c, jossa 5 on artemisiniinin piikin pinta-ala analysoidussa liuoksessa, ja k on kalibrointikäyrän kerroin. Metrologiset tiedot kalibrointikäyrän kertoimen määrittämisestä (k) esitetään taulukossa 7.
Kalibrointikäyrän kertoimen laskennan metrologiset ominaisuudet artemisiniini
1 X Э2 Э Р ЮУ) Дх Е,%
19 1,32 * 10 m 1,84 * О15 4,25 * 10 "95 2,09 1,28 * 10" 1,97 1,90 * 10 "
Taulukossa 8 esitetään artemisiniinin kvantitatiivisen määrityksen tulokset koiruohon vuotuisessa uutteessa.
Artemisiniinin kvantitatiivisen määrityksen tulokset koiruohon yhden vuoden menetelmän HPLC-MS-uutteessa
Metrologiset ominaisuudet (n = 5, P = 95%)
0,039 0,75 * 10 "'0,27 * 10" 2 2,57 0,83 * 10 ° 1,21 0,12 * 10 "'
Kehitetty menetelmä määritteli artemisiniinin määrällisen sisällön ruohossa n. Vuotias kukinnan aikana (taulukko 9). Tekniikka on validoitu - spesifisyys, tarkkuus vahvistettu.
Artemisiniinin sisältö ruohon koiruohon vuotuisena
Artemisiniinin alue ja keräyspäivä (%)
Ivolginskyn alue, 10 km Sotnikovosta, 08/12/2010 0.054 ± 0.003
Ivolginhiy rn, 10 km Sotnikovosta, 08/22/2011 0.027 ^.001
Ivolginskyn alue, okr. a. Oriole, 08/19/2011 0.069 ± 0.004
Kabansky-alue, okr. a. Tarakanovka, 08.22.2011 0.023 ± 0.001
Näytteissä, jotka on kerätty Ivolginskyn alueella, lähellä Oriolessa on suurin määrä artemisiniiniä (0,069%), pienin - Kabansky-piirin näytteissä, okr. a. Torakat (0,023%). Todettiin, että suurin osa artemisiniinitehtaista keskittyy kukoistusvaiheessa - 0,039%, pienin - kasvillisuus- ja viipymisvaiheissa - 0,006 - 0,007%. Artemisiniinikukkivat sisältävät - 0,029%, hieman vähemmän - 0,021% lehdissä, ja vähimmäismäärä varastoissa on 0,007% (taulukko 10).
Taimenen ruohossa oleva artemisiniinin pitoisuus kasvillisuusvaiheesta riippuen vuosittain kasvien eri osissa
kehittämisvaiheessa
kasvillisuus orastava kukinta lehdet kukinto varret
0,006 ± 0,0002 0,007 ± 0,0002 0,039 ± 0,003 0,021 ± 0,001 0,029 ± 0,002 0,007 ± 0,0002
Näin ollen vuotuisen koiruohon ruohon keräämisen optimaalinen aika on kukinta, ja koko antenniosa on suositeltavaa kerätä.
Kaikki saadut tulokset sisältyvät FS-hankkeisiin Sivers-koiruohon ruoho ja vuotuisen koiruohon yrtti.
1. Siversin ja P.: n yhden vuoden ruohon ruohon päädiagnostiikka paljastettiin, raaka-aineiden standardoimiseksi tarvittavat numeeriset indikaattorit kehitettiin. On tunnistettu Siversin ja P.: n, jotka kasvavat Buryatian tasavallan eri alueilla, varannot.
2. Flavonoidien, rasvahappojen, makro- ja mikroravinteiden pitoisuus Sivers n: n ruohossa ja n: n nurmikolla Perustettiin yksi vuosi. Flavonoidit - luteoliini-7-glukosidi, rutiini, kvertsetiini ja kryoerioli havaittiin näissä kasveissa HPLC-MS-menetelmällä. Tutkittujen koiruohon tyyppisten rasvahappojen palmitiini-, linoleeni-, linoleeni-, 10% oktadekeenihappo löytyy myös merkittävistä koiruohoista.
3. On todettu, että kasvien eteeristen öljyjen laadullinen koostumus pysyy vakiona kasvupaikasta ja kehitysvaiheesta riippumatta. Siversin vakio-komponentit ovat 1,8-cyneoli, terpineoli-4, D germacren, p-farneseeni, Selina-4,11-dieeni, neyyli-2-metyylibutanoaatti ja chamazulene sekä Artemisia-ketoni, karyofillen, yhden vuoden ikäinen germakreeni D, p-seleneeni, karyofiilinen oksidi. Eteeristen öljyjen kertyminen kukoistusvaiheessa on suurempi (0,7%) kuin alkuvaiheessa (0,3%). Suurin määrä samazuleenia s. Sivers kerääntyy orastamisen (jopa 62%) ja kukinnan vaiheisiin (jopa 34%).
4. Artemisiniinin (uuttoaineen tyyppi, uuttomenetelmä, uuttamisaika) uuttoedellytykset määritettiin vuosittaisesta yrtistä ja todettiin, että artemisiniinin maksimaalinen uuttaminen saavutetaan ultraäänellä ja esikuumennuksella. Menetelmä artemisiniinin kvantitatiiviseksi määrittämiseksi kehitettiin ja validoitiin yhden vuoden HPLC-MS-menetelmällä (suhteellinen määritysvika ± 1,21%). On todettu, että vuotuisen yrtin ruohossa suurin osa artemisiniinistä kertyy kukinnan aikana (0,039%).
5. Kehitetty raaka-aineiden sääntelyasiakirjat - FS: n ”Sivers-koiruohon ruoho” -hanke ja FS: n hanke ”Koiran ruohon vuosi”.
Luettelo opinnäytetyön aiheista julkaistuista julkaisuista
1. Zhigzhitzhapova, C.B. Eteerisen öljyn kemiallinen koostumus Artemisia gmelinii Web. et Stechm, kotoisin Keski-Aasiasta / C.B. Zhigzhitzhapova, TE Soktoeva, LD Radnaeva ja Plant Chemistry.-2010.-№2.-С. 131-133.
2. Zhigzhitzhapova, C.B. Sivers-koiruohon eteerisen öljyn kemiallinen koostumus Artemisia sieversiana Willd., Kasvatettu Burjaatiassa / S.V. Zhigzhitzhapovassa, TE Soktoeva, LD Radnaeva, V.V. Taraskin // Buryatin osavaltion yliopiston tiedote. Ser. Kemia-Physics. - 2009. -. 3. - s. 69-71.
3. Zhigzhitzhapova, C.B. Sivers-koiruohon eteerisen öljyn koostumus Artemisia sieversiana Willd., Kasvatettu Burjaatiassa ja Irkutskin alueella / S.V. Zhigzhitzhapova, TE Soktoeva, LD Radnaeva, V.V. Taraskin // Venäjän lääketieteen akatemian Siperian sivuliikkeen Itä-Siperian tiedekeskuksen tiedotteet. - 2009. - №2 (66). -C. 103-105.
4. Zhigzhitzhapova, S.V. Eteerisen öljyn koostumus Artemisia sieversiana Willd. kasvien kehityksen eri vaiheissa / S.V. Zhigzhitzhapova, TE Soktoeva, LD Radnaeva // Venäjän lääketieteen akatemian Siperian sivuliikkeen Itä-Siperian tiedekeskuksen tiedotteet. - 2011. - №1 (77). Osa 2. - s. 138-141.
5. Soktoeva, TE Eteerisen öljyn komponenttikoostumus Artemisia glauca Pall, ex Willd. Mongolian / T.E. Soktoeva, S.V. Zhigzhitzhapova, LD
Radnaeva, B.B. Taraskin // Nuorten tutkijoiden tiedote. - Tomsk, 2011. -Vyp. 2. - s. 27-30.
6. Soktoeva, TE Eteerisen öljyn kemiallinen koostumus Artemisia gmelinii Web. Et Stechm. / T.E. Soktoev // Lomonosov-2009: XVI-kansan materiaalit. Conf. opiskelijat, jatko-opiskelijat ja nuoret tutkijat. - Moskova, 2009. - s. 37.
7. Zhigzhitzhapova, C.B. Eristävä öljy, koiruoho Gmelinin kasvistosta Burjaatia ja Mongolia / C.B. Zhigzhitzhapova, TE Soktoeva, LD Radnaeva // ”Kasvien raaka-aineiden kemian ja kemian teknologian uudet saavutukset”: IV All-Russia -materiaalit. tieteellinen. Conf. - Barnaul, 2009. - s. 49–50.
8. Soktoeva, T.E. Sury wormwood Artemisia sieversiana Willd., Joka kasvaa Buryatian tasavallassa / T.E. Soktoyeva, C.B. Zhigzhitzhapova, LD Radnaeva // ”Kemian, bioteknologian ja elintarviketeollisuuden teknologiat ja laitteet”: II Vserossin materiaalit. Scien. Conf. opiskelijat, jatko-opiskelijat ja nuoret tutkijat. - Biysk, 2009. - s. 91–93.
9. Pavlova E.T. Lääkeaineiden komponenttien kromatografinen erotus ja kvantitatiivinen määritys HPLC / TE: llä Soktoeva, T.A. Kolodin // ”Alueen kestävän kehityksen ongelmat”: Venäjän nuorten tutkijoiden koulun seminaarin materiaalit. - Ulan-Ude, 2009. - s. 222-223.
10. Zhigzhitzhapova, S.V. Artemisia L.: n kemiallisten koostumusten vertaileva analyysi, joka kasvaa Keski-Aasiassa / S.V. Zhigzhitzhapova, T.E. Soktoeva, L.D. Radnaeva, O. Grahl-Nilsen // ”Tietojen analyysimenetelmät” Seitsemäs talvi-simposium kemometrialla. - Pietari, 2010. - s. 82-83.
11. Soktoeva, T.E. Keski-Aasiassa / TE: ssä kasvatetun Artemisia L.-suvun polynian eteeristen öljyjen koostumuksen vertaileva analyysi Soktoeva // "Ympäristöystävälliset ja resursseja säästävät teknologiat ja materiaalit": alueen materiaalit, nuorisotieteellinen. Conf. alkaen Intern. osallistumista. - Ulan-Ude, 2010.-S. 109-110.
12. Zhigzhitzhapova, C.B. Artemisia L. / C.B. polynia-suvun eteeriset öljyt. Zhigzhitzhapova, TE Soktoeva, LD Radnaeva // ”Perinteisen lääketieteen kehitys Venäjällä: kokemus, tutkimus, näkökulmat”: materiaalit nauchn. Conf. alkaen Intern. osallistumista. - Ulan-Ude, 2010. - s. 405-407.
13. Soktoeva, T.E. Sisarusten eteerisen öljyn koostumus koiruoho Artemisia sieversiana Willd. / T.E. Soktoyeva, C.B. Zhigzhitzhapova, LD Radnaeva // ”Baikalin Aasian todelliset opinnot”: Intern. Scien. Conf, - Ulan-Ude, 2010. - s. 309-312.
14. Badmaeva, E.E. Eteerisen öljyn koostumus Artemisia macrocephala Jacq. ex Bess, joka kasvaa Mongoliassa / E.E. Badmaeva,
TE Soktoeva // ”Venäjän ja sen lähialueiden ekologia”: XV Internationalin materiaalit. ympäristönsuojelu - Novosibirsk, 2010. - s. 325.
15. Badmaeva, E.E. Eteerisen öljyn koostumus Artemisia annua / EE. Badmaeva, T.E. Soktoyeva, C.B. Zhigzhitzhapova, LD Radnaeva // "Ympäristöystävälliset ja resursseja säästävät teknologiat": materiaalit Vseross. nuorisokonferenssi alkaen Intern. osallistumista. - Ulan-Ude, 2011. -C. 156-157.
16. Soktoeva, T.E. Artemisiniinin uuttaminen koiruohon vuosittaisesta Artemisia annua L. / T.E. Soktoeva, G.L. Ryzhov, K.A. Dychko, V.V. Khasanov, C.B. Zhigzhitzhapova, LD Radnaeva // ”Baikalin alueen kehityksen painopisteet ja piirteet”: Vth Internationalin materiaalit. Scien. Conf. - Ulan-Ude, 2011. - s. 127-128.
17. Zhigzhitzhapova, C.B. Artemisia annua L. / C.B: n kemiallinen koostumus. Zhigzhitzhapova, TE Soktoeva, LD Radnaeva // ”Baikalin alueen ja sen lähialueiden kasvillisuus”: Vserossin materiaalit. Scien. Conf. - Ulan-Ude, 2011. - s. 152-153.
AAS-atomiabsorptiospektrofotometria
RH täysin kuivia raaka-aineita
BAS biologisesti aktiivisia aineita
GZ: n biologiset varannot
BH-paperikromatografia
WHO: n Maailman terveysjärjestö
HPLC-MS korkean suorituskyvyn nestemassan kromatografia
GF-valtion farmakopea
Pääosien ISC-menetelmä
CO-standardinäyte
nämä ohutkerroskromatografia
EZ: n operatiiviset varaukset
SRM Valitse reaktion seuranta
Kirjailija ilmaisee vilpittömän kiitoksen opinnäytetyön ohjaajalle, DI, prof. LD Radnaeva sekä tohtori, dosentti, vanhempi tutkija Venäjän tiedeakatemian Siperian sivukonttorin Baikalin instituutti Zhigzhitzhapova C.B, kemian tohtori, kunniaprofessori Tomskin valtionyliopisto Ryzhova G.L. apua ja tukea työn valmistelussa.
Se allekirjoitettiin painettuna 11/21/2011.Muoto 60x84 1/16. Offsetpaperi. Volume 1,5kpl. l. Kiertäminen 100. Tilausnumero 67.
Painettu kustantajan BNTS SB RAS: n painotaloon. 670047 Ulan-Ude, ul. Sakhyanova, 6.
Soktoevin opinnäytetyön sisältö Tuyana Erdemovna :: 2011 :: Ulan-Ude
Luku 1. LITERATUURIN KATSAUS
Artemisia L.-suvun tutkimusta koskeva nykyinen tilanne.
1.1. Sivers-koiruohon ja 12-vuotisen koiruohon kasvitieteelliset ominaisuudet
1.2. Eteeriset öljyt ja Wormwood-suvun luonnolliset atsuleenikasvit
1.2.1. Eteeristen öljyjen ja luonnollisten azuleeni-14 kasvien Wormwood-kemiallinen koostumus
1.2.2. Wormwood-suvun kasvien eteeristen öljyjen käyttö lääketieteessä
1.2. Artemisiniini: löytö, rakenne ja synteesi, fysikaalis-kemialliset 31 ominaisuudet, antiplasmodiumin vaikutusmekanismi
1.3. Wormwood-suvun kasvien rasvahappokoostumus
1.4. Wormwood-suvun kasvien fenoliset yhdisteet
1.5. Wormwood-suvun kasvien alkuainekoostumus 38 PÄÄTELMÄT PÄÄKÄYTTÖÖN
LUKU 2. OBJEKTIEN JA MENETELMIEN OMINAISUUDET 41 TUTKIMUS
2.1. Opiskeluobjektit, raaka-aineiden näytteet - Sivers-koiruohon ruoho ja 41 yrttiyhdistelmää vuosittain
2.2. Tutkimusmenetelmät
2.2.1. Biologiset tutkimusmenetelmät
2.2.1.1. Anatomiset ja diagnostiset tutkimukset
2.2.1.2. Resurssitutkimus
2.2.2. Menetelmät 43 biologisesti aktiivisen aineen kvalitatiiviseksi ja kvantitatiiviseksi määrittämiseksi
2.2.3. Merchandising-analyysi: menetelmät 50: n laadukkaan raaka-aineen luomiseksi
2.2.4. Tilastollisen käsittelyn menetelmät. Tärkein komponenttimenetelmä.
LUKU 3. HERBALISEN HERBALISIN FARMAKOGNOSTIIKAN ANALYYSI 53 CIVERS
3.1. Sivers-koiruohon ruohon mikroskooppinen analyysi
3.2. Sibers Wormwood -osakkeet
3.3. Tutkimus tärkeimmistä BAS ruoho sisarukset koiruoho
3.3.1. Komponenttien laadullinen ja määrällinen sisältö 64 Sivers-koiruohun eteerinen öljy
3.3.1.1. Eteerisen öljyn ja 64 hamazulenan kertymisen kemiallinen koostumus ja dynamiikka Sivers-koiruohon ruohossa eri Burjanian alueilla
3.3.1.2. Eteerisen öljyn ja chamazuleenin kertymisen erityispiirteet 65 Sivers-koiruohon ruohossa kasvien kehityksen eri vaiheissa
3.3.1.3. Ruohon eteerisen öljyn pienempien komponenttien kertyminen 71 Sivers koiruoho
3.3.1.4. Ominaisuudet öljyn ja chamazuleenin kertymisestä ruohoon 72 Sivers koiruoho kasvien eri osista
3.3.2. Flavonoidien ja tanniinien laadullinen ja määrällinen sisältö Sivers-koiruohon ruohossa
3.3.3. Sivers-koiruohon ruohon rasvahappokoostumus
3.3.4. Yrttiyhdistelmän vuosittainen koostumus PÄÄTELMÄT LUKUUN
LUKU 4. LÄÄKÄYTTÖJÄRJESTELMIEN FARMAKOGNOSTIIKAN ANALYYSI 83 YKSI VUOSI
4.1. Vuosittainen yrtti-koiruohon mikroskooppinen analyysi
4.2. Varsikoiden vuotuiset varastot
4.3. Tutkimus tärkeimmistä BAS ruohon koiruohoista vuosittain
4.3.1. Eteerisen öljyn komponenttien kvalitatiivinen ja kvantitatiivinen sisältö yrttipohjan vuosittaisessa
4.3.1.1. Eteeristen öljyjen kertymistä kemiallisesta koostumuksesta ja dynamiikasta 92 ruohossa yhden vuoden koiruohosta eri kasvualueista
4.3.1.2. Eteeristen öljyjen kertymisen erityispiirteet koiruohon ruohossa ^ vuosittain eri kehitysvaiheissa ja laitoksen eri osissa
4.3.2. Flavonoidien ruohon laadullinen ja määrällinen määritys 100 koiruohoa vuodessa
4.3.3. Yrttiyökarjan vuosittainen rasvahappokoostumus ^ ® *
4.3.4. Yrttiyhdistelmän elementtikoostumus vuosittain
4.4. Menetelmän kehittäminen artemisiniinin kvantitatiiviseksi määrittämiseksi koiruohon 103 ruohossa vuosittaisen HPLC-MS-menetelmän avulla
4.4.1. Artemisiniinin kvantitatiivisen uuttamisen ehtojen valinta 103 yhden vuoden koiruohosta
4.4.2. Tekniikan kehittäminen artemisiniinin 104 kvantitatiiviseksi määrittämiseksi HPLC-MS: llä
4.4.3. Artemisiniinin kvantitatiivinen pitoisuus vuotuisessa koiruohossa eri kasvualueista
4.4.4. Artemisiinin kvantitatiivisen sisällön analyysi nurmikolla 107 koiruoho vuosittain eri kehitysvaiheissa ja eri kasvien osissa
LUKU 5. NÄYTTÖJÄRJESTELMIEN ASETTAMINEN 111 RAAKA-AINEIDEN HYÖDYTTÄMINEN
5.1. Raaka-aineiden morfometriset indikaattorit
5.2. Ruohon sisarusten koiruohun standardointi
5.2.1. Merchandising-merkit ruoho Sills koiruoho!
5.2.2. Siversin koiruupähkinän standardointi 115 hamazulelenin sisällön mukaan eteerisen öljyn koostumuksessa
5.2.3. Luodaan Sivers-koiruohon ruohon säilyvyysaika
5.3. Yrttiyhdistelmän vuosittainen standardointi ^ ^ ^
5.3.1. Hyödykkeen indikaattorit ruoho sagebrush vuosittain * '^
5.3.2. Kasvipuun vuosittainen standardointi artemisiniinin sisällöstä
5.3.3. Yrittäjämunan vuotuisen säilyvyyden määrittäminen
Opinnäytetyön esittely aiheesta "Farmaseuttinen kemia, farmakognosia", Soktoeva, Tuyana Erdemovna, abstrakti
Aiheen merkitys. Artemisia-suvun (koiruoho) kasvit ovat lupaavia lähteitä biologisesti vaikuttaville aineille, kuten tarragonin koiruoho Artemisia dracunculus L., koiruoho Artemisia absinthium L., koiruoho Artemisia vulgaris L. käytetään laajalti folkissa, perinteisessä lääketieteessä ja elintarviketeollisuudessa. Artemisia annua L., joka on vuotuinen koiruoho, otettiin menestyksekkäästi kulttuuriin monissa maissa, ja WHO suositteli vuonna 2001 sen tärkeimmäksi artemisiniinin lähteeksi, joka on malarian ensihoito. Nykyään artemisiniiniä tuottavat maat tarjoavat noin neljänneksen maailmanlaajuisista terveysvaatimuksista [1, 2]. 137-vuotiailta eristettiin biologisesti aktiivisia yhdisteitä, mukaan lukien 40 sesquiterpeeniä, 10 triterpeeniä, 7 kumariinia, 46 flavonoidia, jotka voivat toimia lääkekehityksen perustana [3]. 1900-luvun 80-luvulla ryhmä tutkijoita [4] yritti kasvattaa Neuvostoliiton yhden vuoden kasviston viljelevää osaa ULI: ssa (Moskova). Nykyään Tomskin valtionyliopistossa toteutetaan merkittäviä teoksia ensimmäisen vuoden erän käyttöönotolle. Burjaatiassa n. Vuosi on villieläinlaji.
Yhden vuoden ikäisen Buryatian kanssa Sivers koiruoho Artemisia sieversiana Willd on laajalle levinnyt, mikä on myös lupaava laji. P. Sieversin ruoho sisältää flavonoideja, eteeristä öljyä, kumariinia [5-8]. Seaberan eteerinen öljy on kiinnostava Chamazulenen lähde, ei-toksinen yhdiste, jolla on anti-inflammatorisia, bakterisidisiä, regeneratiivisia vaikutuksia [9, 10].
Tähän saakka Buryatian vuotuisen kasviston Siversin koiruohon ja koiruohon yksityiskohtainen kemiallinen tutkimus ei ole toteutettu lupaavina biologisesti aktiivisten aineiden lähteinä, joten niiden tutkimus on kiireellinen tehtävä.
Tavoite: Sivers-koiruohon Artemisia sieversiana Willdin farmakologinen tutkimus. ja koiruohon vuosittainen Artemisia annua L. arvokkaina biologisesti aktiivisten aineiden lähteinä.
Tämän tavoitteen saavuttamiseksi on tarpeen ratkaista seuraavat tehtävät:
1. Tunnista Siversin maanpäällisen osan anatomiset ja diagnostiset ominaisuudet s. Ja s. Yksi vuosi, määrittele raaka-aineiden hyödykkeiden indikaattorit, arvioi varannot ja mahdollisuus kerätä yhden vuoden ja Siverit Burjan tasavallan alueella;
2. Tutki näiden kasvien biologisesti aktiivisten aineiden pääryhmien kemiallista koostumusta ja määrittää niiden kvantitatiivinen sisältö, määrittää eteeristen öljyjen ja artemisiniinin paikallistamisen kasvien yksittäisissä osissa, tutkia niiden kerääntymisen dynamiikkaa kehitysvaiheissa ja määrittää optimaaliset keräysolosuhteet;
3. Kehitetään menetelmä artemisiniinin kvantitatiiviseksi määrittämiseksi yhden vuoden iän osassa;
4. Määrittele biologisten aktiivisten perusaineiden sisällön laatuindikaattorit ja -standardit, kehittämään lääkkeiden raaka-aineiden sääntelyasiakirjoja - Sivers-koiruohon ruoho ja yhden vuoden koiruohon ruoho.
Tieteellinen uutuus. Sivers- ja P.-vuotuisen ruohon päädiagnostiikkaan perustettiin, kehitettiin raaka-aineiden standardoimiseksi tarvittavat numeeriset indikaattorit.
Tutkimus tehtiin Siversin ruohon ja yhden vuoden ruohon kemiallisesta koostumuksesta. Määritettiin eteeristen öljyjen, flavonoidien, rasvahappojen, makro- ja mikroelementtien pitoisuus. Flavonoidit - luteoliini-7-glukosidi, rutiini, kvertsetiini ja kryoerioli havaittiin näissä kasveissa HPLC-MS-menetelmällä. Tutkittujen koiruohon tyyppisten rasvahappojen palmitiini-, linoleeni-, linoleeni-, 10% oktadekeenihappo löytyy myös merkittävistä koiruohoista.
Artemisiniinin uuttamisen edellytykset (uuttoaineen tyyppi, uuttomenetelmä, uuttamisaika) määritettiin vuosittaisesta yrtistä ja todettiin, että artemisiniinin maksimaalinen uuttaminen saavutetaan ultraääni- ja alikriittisellä CO2-uuttamisella. HPLC-MS: llä on todettu, että suurin osa artemisiniinistä yhden vuoden ikäisissä on kukinnusvaiheessa kukinnoissa.
Tutki eteerisen öljyn kertymisen dynamiikkaa riippuen kehitysvaiheesta ja laitoksen osasta. Suurin määrä kaamatsuleeni eteeristä öljyä s. Siversa kerääntyy kukinnan kukinnan ja kukinnan vaiheisiin.
BAS: n laatukriteerit sisältyvät sääntelyasiakirjoihin.
Käytännön merkitys. Siversin asuinalueen varaukset ja mahdollinen hankintavolyymi sekä yhden vuoden ratkaisu Buryatian tasavallan alueella (Siversin asuinpaikka - 0,1-73,7 tonnia vuodessa ja yhden vuoden ratkaisu 1,2–212,3 tonnia vuodessa).
Tekniikka on kehitetty artemisiniinin kvantitatiiviseen määritykseen p. Grassissa vuosittain HPLC-MS-menetelmällä. Raaka-aineiden näytteenvalmistusolosuhteet artemisiniinin kvantitatiivista määrittämistä varten ovat tieteellisesti perusteltuja.
Raaka-aineiden standardointi on toteutettu, FS-hankkeita on kehitetty - "Sivers Wormwood Herbal" ja "Wormwood One-Year Grass".
Täytäntöönpanon aste. Eteeristen öljyjen ja mikroskooppisten analyysitietojen keräämismenetelmä testattiin ja otettiin osaksi liittovaltion valtiollisen korkeakouluopetuksen laitos Farmasian osaston ”Buryatin osavaltion yliopisto” opetusprosessia (6. syyskuuta 2011 annettu täytäntöönpanolaki nro 1). FS: n hankkeet Sivers-koiruohon ja yhden vuoden koiruohon ruoho on valmisteltu vastikkeeksi.
Työn aprobointi. Opinnäytetyön keskeiset säännökset esiteltiin ja niistä keskusteltiin: tieteellis-käytännön konferenssissa, jossa kansainvälinen osallistuminen ”Perinteisen lääketieteen kehitys Venäjällä: kokemus, tutkimus, näkymät” (Ulan-Ude, 2010); Seitsemäs talvi-simposium kemometrian "nykyaikaiset menetelmät tietojen analysoimiseksi" (Pietari, 2010); kansainvälinen tieteellinen konferenssi, joka on omistettu Buryatin osavaltion yliopiston 15-vuotisjuhlalle "Baikalin Aasian todelliset opinnot" (Ulan-Ude, 2010); V kansainvälinen tieteellinen-käytännön konferenssi "Baikalin alueen kehityksen painopisteet ja ominaisuudet" (Ulan-Ude, 2011); X kansainvälinen tieteellinen-käytännön konferenssi "Etelä-Siperian ja Mongolian kasvitieteen ongelmat" (Barnaul, 2011); IV All-Russian -konferenssi "Kasvimateriaalien kemian ja kemiallisen teknologian uudet edistysaskeleet" (Barnaul, 2009); XVI Kansainvälinen opiskelijoiden, jatko-opiskelijoiden ja nuorten tutkijoiden konferenssi "Lomonosov-2009" (Moskova, 2009); XV Kansainvälinen ekologinen opiskelijakonferenssi "Venäjän ja sen lähialueiden ekologia" (Novosibirsk, 2010); II Opiskelijoiden, jatko-opiskelijoiden ja nuorten tutkijoiden koko Venäjän tieteellinen-käytännön konferenssi "Kemian, bioteknologian ja elintarviketeollisuuden teknologiat ja laitteet" (Biysk, 2009); Koko Venäjän tieteellinen-käytännön konferenssi "Baikalin alueen ja sen lähialueiden kasvillisuus" (Ulan-Ude, 2011); V Venäjän nuorten tutkijoiden kouluseminaari ”Alueen kestävän kehityksen ongelmat” (Ulan-Ude, 2009); alueellinen nuorisotieteellinen-käytännön konferenssi, jossa kansainvälinen osallistuminen "Ympäristöystävälliset ja resursseja säästävät teknologiat ja materiaalit" (Ulan-Ude, 2010).
Teos toteutettiin osana tutkimushankkeita: RFBR: nro 08-04-90202-Monga ”Keski-Aasian biologisesti aktiivisten yhdisteiden biosynteesin biogeneettisten mallien tutkimus” (2008–2009), nro 08-04-9803 7-rsibirya ja
Kasvien kemiallinen koostumus Baikalin alueen ekosysteemien tilan osoittimena ”(2008-2010); monitieteinen integraatioprojekti №93 "Tutkimuksen kehittäminen lääketieteellisen kemian ja farmakologian alalla tieteellisenä perustana kotimaisten lääkkeiden kehittämiselle"; yhteinen projekti Mongolian tiedeakatemian kanssa "Uusien lipo- ja nanosomaalisten huumausaineiden hankkiminen luonnon raaka-aineilla"; RFBR: № 10-03-16001-mobzros ”Nuorten tutkijoiden liikkuvuus” (2010), №11-03-90705-nuorten venäläisten tutkijoiden tieteellinen työ Venäjän koulutuksen johtavissa tieteellisissä järjestöissä 2011 (2011).
Julkaisut. Tulosten mukaan julkaistiin 17 tieteellistä artikkelia, joista 3 julkaistiin Venäjän federaation puolustus- ja tiedeministeriön korkeakoulukomitean suosittelemissa aikakauslehdissä.
Puolustukseen on otettu:
• Anatomisen rakenteen, kalakantojen, Siversin ja P: n aitoutta koskevien kriteerien tutkimuksen tulokset, jotka kasvavat Burjaniassa;
• biologisesti aktiivisten aineiden kemiallisen tutkimuksen tulokset ja niiden kertymisen dynaaminen dynamiikka;
• Siversin maanpäällisen osan standardointia koskevien tutkimusten tulokset s. Ja s. Yksi vuosi.